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检测方法 AI 结构化解析
GB 4789.3 2016 食品安全国家标准 食品微生物学检验 大肠菌群计数
发布日期 2016-12-23
实施日期 2017-06-23
替代标准 GB 4789.3—2010、GB/T 4789.32—2002、SN/T 0169—2010
解析引擎 v3.4
适用范围 本标准规定了食品中大肠菌群(Coliforms)计数的方法。本标准第一法适用于大肠菌群含量较低的食品中大肠菌群的计数;第二法适用于大肠菌群含量较高的食品中大肠菌群的计数。
0 参数限值 2 试验方法 1 计算公式 2 术语 31 约束 0 引用
解析版本
AI 问答 术语 限值速查 限值判定 试验方法 计算公式 约束条件 引用标准 能力表述 质检复核
大肠菌群2.1
在一定培养条件下能发酵乳糖、产酸产气的需氧和兼性厌氧革兰氏阴性无芽胞杆菌。
最可能数2.2
基于泊松分布的一种间接计数方法。
本标准为方法/管理类标准,无数值限值指标表;检出限、精密度等要求见「试验方法」「约束条件」页签
检测结果限值判定(演示)
检测项目
测定结果
判定逻辑:测定结果与限值直接比对(未含测量不确定度保护带),正式报告请按 ILAC-G8 / 标准原文复核。
就这本标准问我
回答基于本标准的结构化解析与条款文本检索生成,附条款溯源;AI 解读请以标准正式原文为准。
看完方法,直接落成原始记录:自动带出检测要求与质控核查项,录读数自动计算判定,可导出活公式 Excel
第一法 大肠菌群MPN计数法第6章、第7章
MPN法是统计学和微生物学结合的一种定量检测法。待测样品经系列稀释并培养后,根据其未生长的最低稀释度与生长的最高稀释度,应用统计学概率论推算出待测样品中大肠菌群的最大可能数。
仪器 11 项试剂 7 项步骤 4 步
仪器设备
恒温培养箱(36 ℃ ±1 ℃)冰箱(2℃~5℃)恒温水浴箱(46℃ ±1℃)天平(感量0.1 g)均质器振荡器无菌吸管(1 mL(具0.01 mL刻度)、10 mL(具0.1 mL刻度)或微量移液器及吸头)无菌锥形瓶(容量500 mL)无菌培养皿(直径90 mm)pH计或pH比色管或精密pH试纸菌落计数器
试剂材料
月桂基硫酸盐胰蛋白胨(LST)肉汤煌绿乳糖胆盐(BGLB)肉汤结晶紫中性红胆盐琼脂(VRBA)无菌磷酸盐缓冲液无菌生理盐水1 mol/L NaOH溶液(1 mol/L)1 mol/L HCl溶液(1 mol/L)
分析步骤
1样品的稀释:按7.1进行。
2初发酵试验:每个样品,选择3个适宜的连续稀释度的样品匀液(液体样品可以选择原液),每个稀释度接种3管月桂基硫酸盐胰蛋白胨(LST)肉汤,每管接种1 mL(如接种量超过1 mL,则用双料LST肉汤),36℃±1℃培养24h±2h,观察倒管内是否有气泡产生,24h±2h产气者进行复发酵试验(证实试验),如未产气则继续培养至48h±2h,产气者进行复发酵试验。未产气者为大肠菌群阴性。
3复发酵试验(证实试验):用接种环从产气的LST肉汤管中分别取培养物1环,移种于煌绿乳糖胆盐肉汤(BGLB)管中,36℃±1℃培养48h±2h,观察产气情况。产气者,计为大肠菌群阳性管。
4大肠菌群最可能数(MPN)的报告:按7.3确证的大肠菌群BGLB阳性管数,检索MPN表(见附录B),报告每g(mL)样品中大肠菌群的MPN值。
第二法 大肠菌群平板计数法第8章、第9章
大肠菌群在固体培养基中发酵乳糖产酸,在指示剂的作用下形成可计数的红色或紫色,带有或不带有沉淀环的菌落。
仪器 11 项试剂 7 项步骤 5 步
仪器设备
恒温培养箱(36 ℃ ±1 ℃)冰箱(2℃~5℃)恒温水浴箱(46℃ ±1℃)天平(感量0.1 g)均质器振荡器无菌吸管(1 mL(具0.01 mL刻度)、10 mL(具0.1 mL刻度)或微量移液器及吸头)无菌锥形瓶(容量500 mL)无菌培养皿(直径90 mm)pH计或pH比色管或精密pH试纸菌落计数器
试剂材料
月桂基硫酸盐胰蛋白胨(LST)肉汤煌绿乳糖胆盐(BGLB)肉汤结晶紫中性红胆盐琼脂(VRBA)无菌磷酸盐缓冲液无菌生理盐水1 mol/L NaOH溶液(1 mol/L)1 mol/L HCl溶液(1 mol/L)
分析步骤
1样品的稀释:按7.1进行。
2平板计数:选取2个~3个适宜的连续稀释度,每个稀释度接种2个无菌平皿,每皿1 mL。同时取1 mL生理盐水加入无菌平皿作空白对照。及时将15 mL~20 mL融化并恒温至46℃的结晶紫中性红胆盐琼脂(VRBA)约倾注于每个平皿中。小心旋转平皿,将培养基与样液充分混匀,待琼脂凝固后,再加3 mL~4 mL VRBA覆盖平板表层。翻转平板,置于36℃±1℃培养18h~24h。
3平板菌落数的选择:选取菌落数在15 CFU~150 CFU之间的平板,分别计数平板上出现的典型和可疑大肠菌群菌落(如菌落直径较典型菌落小)。典型菌落为紫红色,菌落周围有红色的胆盐沉淀环,菌落直径为0.5 mm或更大,最低稀释度平板低于15 CFU的记录具体菌落数。
4证实试验:从VRBA平板上挑取10个不同类型的典型和可疑菌落,少于10个菌落的挑取全部典型和可疑菌落。分别移种于BGLB肉汤管内,36℃±1℃培养24h~48h,观察产气情况。凡BGLB肉汤管产气,即可报告为大肠菌群阳性。
5大肠菌群平板计数的报告:经最后证实为大肠菌群阳性的试管比例乘以9.3中计数的平板菌落数,再乘以稀释倍数,即为每g(mL)样品中大肠菌群数。例:10^-4样品稀释液1mL,在VRBA平板上有100个典型和可疑菌落,挑取其中10个接种BGLB肉汤管,证实有6个阳性管,则该样品的大肠菌群数为:100×6/10×10^4/g(mL)=6.0×10^5CFU/g(mL)。若所有稀释度(包括液体样品原液)平板均无菌落生长,则以小于1乘以最低稀释倍数计算。
公式已就位——生成原始记录后,这些公式将变成 Excel 里的活公式,改读数自动重算重判
大肠菌群平板计数公式9.5
N = \text{阳性管比例} × \text{平板菌落数} × \text{稀释倍数}
计算表达式(可直接用于 Excel/程序)
N = (阳性管比例 × 平板菌落数 × 稀释倍数)
N每g(mL)样品中大肠菌群数CFU/g(mL)
阳性管比例证实为大肠菌群阳性的试管比例
平板菌落数9.3中计数的平板菌落数CFU
稀释倍数样品稀释倍数
标准中"施加在执行过程与条件上的要求"(C1 环境 / C4 样品 / C6 质控 / C7 条件限值 / C8 适用范围 / C9 过程参数),是原始记录模板与自动核查的数据源。
C2 · 试验介质/溶液样品匀液 · pH
6.5 ~ 7.5 pH出处:7.1.2
C2 · 试验介质/溶液培养基 · pH
6.8±0.2 pH出处:9.2.2
C2 · 试验介质/溶液培养基 · pH
7.2±0.1 pH出处:9.2.2
C2 · 试验介质/溶液培养基 · pH
7.4±0.1 pH出处:9.2.2
C2 · 试验介质/溶液贮存液 · pH
7.2±0.2 pH出处:9.2.2
C2 · 试验介质/溶液氢氧化钠溶液 · 浓度
称取 40 g 氢氧化钠溶于 1 000 mL 无菌蒸馏水中。出处:9.2.2
C2 · 试验介质/溶液盐酸溶液 · 浓度
移取浓盐酸 90 mL, 用无菌蒸馏水稀释至 1 000 mL。出处:9.2.2
C5 · 设备能力要求恒温培养箱 · 温度
36±1 ℃出处:—
C5 · 设备能力要求冰箱 · 温度
2 ~ 5 ℃出处:4.1
C5 · 设备能力要求天平 · 感量
≤ 0.1 g出处:4.3
C5 · 设备能力要求无菌吸管 · 容量及刻度
无菌吸管:1 mL(具 0.01 mL 刻度)、10 mL(具 0.1 mL 刻度)或微量移液器及吸头。出处:4.6
C5 · 设备能力要求无菌锥形瓶 · 容量
500±None mL出处:4.7
C5 · 设备能力要求无菌培养皿 · 直径
90±None mm出处:4.8
C6 · 精密度/质控限典型菌落 · 菌落特征及计数规则
典型菌落为紫红色,菌落周围有红色的胆盐沉淀环,菌落直径为 0.5 mm 或更大,最低稀释度平板低于 15 CFU 的记录具体菌落数。出处:9.2.2
C8 · 适用范围与限制MPN表 · 检样量换算
表内所列检样量如改用1 g(mL)、0.1 g(mL)和0.01 g(mL)时,表内数字应相应降低10倍;当检样量改变时出处:9.2.2
C8 · 适用范围与限制MPN表 · 检样量换算
如改用0.01 g(mL)、0.001 g(mL)和0.000 1 g(mL)时,则表内数字应相应增高10倍,其余类推。当检样量改变时出处:9.2.2
C9 · 过程控制参数固体和半固体样品 · 称样量、稀释液体积、均质转速和时间
称取 25 g 样品,放入盛有 225 mL 磷酸盐缓冲液或生理盐水的无菌均质杯内,8 000 r/min~10 000 r/min 均质 1 min~2 min,或放入盛有 225 mL 磷酸盐缓冲液或生理盐水的无菌均质袋中,用拍击式均质固体和半固体样品出处:5.7
C9 · 过程控制参数液体样品 · 取样量、稀释液体积、混匀方式
液体样品:以无菌吸管吸取 25 mL 样品置盛有 225 mL 磷酸盐缓冲液或生理盐水的无菌锥形瓶(瓶内预置适当数量的无菌玻璃珠)或其他无菌容器中充分振摇或置于机械振荡器中振摇,充分混匀,制成 1:10 的样品匀液。液体样品出处:7.1.1
C9 · 过程控制参数样品匀液 · 稀释操作
用 1 mL 无菌吸管或微量移液器吸取 1:10 样品匀液 1 mL,沿管壁缓缓注入 9 mL 磷酸盐缓冲液或生理盐水的无菌试管中(注意吸管或吸头尖端不要触及稀释液面),振摇试管或换用 1 支 1 mL 无菌吸管反复吹打,使其混合均匀,制成出处:7.1.3
C9 · 过程控制参数稀释操作 · 吸管更换
每递增稀释1次,换用1支1 mL无菌吸管或吸头。出处:7.1.5
C9 · 过程控制参数样品制备至接种 · 时间
≤ 15 min出处:7.1.5
C9 · 过程控制参数样品 · 接种稀释度、管数、每管接种量
每个样品,选择3个适宜的连续稀释度的样品匀液(液体样品可以选择原液),每个稀释度接种3管月桂基硫酸盐胰蛋白胨(LST)肉汤,每管接种1 mL(如接种量超过1 mL,则用双料LST肉汤), 36;出处:7.1.5
C9 · 过程控制参数样品 · 稀释度、平皿数、每皿接种量
选取 2 个~3 个适宜的连续稀释度,每个稀释度接种 2 个无菌平皿,每皿 1 mL。出处:7.1.5
C9 · 过程控制参数空白对照 · 生理盐水用量
1±None mL出处:9.2.1
C9 · 过程控制参数BGLB肉汤管 · 培养温度和时间
36±1 ℃出处:9.2.2
C9 · 过程控制参数试管 · 分装量
10±None mL出处:9.2.2
C9 · 过程控制参数培养基 · 灭菌温度和时间
121±None ℃出处:9.2.2
C9 · 过程控制参数培养基 · 煮沸时间及倾注温度
煮沸 2 min,将培养基融化并恒温至 45℃~50℃ 倾注平板。出处:9.2.2
C9 · 过程控制参数培养基 · 使用时限
≤ 3 h出处:9.2.2
C9 · 过程控制参数稀释液 · 灭菌条件
121±None ℃出处:9.2.2
C9 · 过程控制参数生理盐水 · 灭菌条件
121±None ℃出处:9.2.2
未抽取到引用标准。
检测能力(方法标准)认可领域:01 生物 › 0101 食品的微生物检测
序号检测对象项目/参数领域代码检测标准(方法)名称及编号(含年号)说明备注
序号名称
1食品1第一法 大肠菌群MPN计数法010101《食品安全国家标准 食品微生物学检验 大肠菌群计数》GB 4789.3-2016 第6章、第7章
22第二法 大肠菌群平板计数法010101《食品安全国家标准 食品微生物学检验 大肠菌群计数》GB 4789.3-2016 第8章、第9章
共 2 项参数:2 项已自动推荐领域代码,0 项待人工确认。领域代码依据 CNAS-AL06:2024 规则推荐,检测对象依据:标准名称(检验对象);正式申报前请人工核对,「说明」列的限制范围(只测/不测、量程等)按实验室实际填写。
解析模型与复核模型对以下关键数值意见不一。 点击您认可的一侧卡片即可投票,多数人的意见即最终结论;每项仅可投一次,首次投票 +2 LP。 已定案项目会在正文对应位置标注 ⚖,悬停可见两模型的分歧详情。
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