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检测方法 AI 结构化解析
GB/T18204.3-2025　公共场所卫生检验方法 第 3 部分: 空气微生物指标 Examination methods for public places—Part 3: Airborne microorganism indicators
发布日期 2025-05-30
实施日期 2025-12-01
替代标准 GB/T 18204.3—2013
解析引擎 v3.4
适用范围 本文件描述了公共场所空气中细菌总数、真菌总数、β-溶血性链球菌和嗜肺军团菌的现场采样与检验方法。本文件适用于公共场所中空气微生物指标的测定,其他场所参照执行。
3 参数限值 8 试验方法 4 计算公式 6 术语 119 约束 3 引用 来源：国家标准全文公开系统
解析版本
AI 问答 术语 限值速查 限值判定 试验方法 计算公式 约束条件 引用标准 能力表述 质检复核
细菌总数3.1
在营养琼脂培养基上经 36 ℃±1 ℃ 培养 48 h 所生长发育的嗜中温性需氧和兼性厌氧菌落的总数。
真菌总数3.2
在沙氏琼脂培养基上经 28℃±1℃ 、 3d～5d 培养所形成的菌落数。
β-溶血性链球菌3.3
能产生溶血素，血平板上在菌落周围形成界限分明、完全透明的溶血环( β -型溶血)的化脓(或A群)链球菌和无乳(或B群)链球菌。
嗜肺军团菌3.4
两端钝圆，有鞭毛，无芽孢和荚膜的革兰氏阴性杆菌，具有在含有L-半胱氨酸和三价铁盐缓冲液的活性炭-酵母提取液培养基上生长的特性，经生化试验和血清学试验鉴定确认的一种具有致病性的军团菌，是引起军团菌病的主要菌型。
撞击法3.5
采用撞击式空气微生物采样器,使空气通过惯性撞击,从而将悬浮在空气中的微生物采集到采样介质上的采样方法。
自然沉降法3.6
将培养基平板暴露在空气中,微生物依靠重力作用自然沉降到平板上的采样方法。
细菌总数
公共场所空气—CFU/m³4.1
细菌总数
公共场所空气—CFU/皿4.2
真菌总数
公共场所空气—CFU/m³5.1
检测结果限值判定（演示）
检测项目
测定结果
判定逻辑：测定结果与限值直接比对（未含测量不确定度保护带），正式报告请按 ILAC-G8 / 标准原文复核。
就这本标准问我
回答基于本标准的结构化解析与条款文本检索生成，附条款溯源；AI 解读请以标准正式原文为准。
看完方法，直接落成原始记录：自动带出检测要求与质控核查项，录读数自动计算判定，可导出活公式 Excel
撞击法4.1
采用撞击式空气微生物采样器，使空气通过狭缝或小孔产生高速气流，将悬浮在空气中的微生物采集到营养琼脂平板上，经36℃±1℃、48 h培养后得到细菌菌落数。
仪器 5 项试剂 5 项步骤 4 步
仪器设备
六级筛孔撞击式微生物采样器高压蒸汽灭菌器恒温培养箱（36℃±1℃）无菌平皿（直径90 mm）pH计或精密pH试纸
试剂材料
蛋白胨（10.0 g）牛肉浸膏（3.0 g）氯化钠（5.0 g）琼脂（20.0 g）纯水（GB/T 6682三级水或以上）
分析步骤
1采样点应符合附录A中A.1的要求。
2采样时关闭门窗15 min~30 min，在难以关闭门窗的公共场所采样时，应保持当时的环境状态。记录室内空调等设备运行状况、门窗状况、人员数量、温湿度及天气状况等。
3应无菌操作，将营养琼脂平板逐级装入六级筛孔撞击式微生物采样器，以28.3 L/min流量采集5 min~15 min。采样器使用应按照说明书要求进行。
4将采集后的营养琼脂平板倒置于36℃±1℃培养箱中培养48 h±2 h，菌落计数。
自然沉降法4.2
将营养琼脂平板暴露在空气中，微生物依靠重力作用自然沉降到平板上，经36℃±1℃、48 h培养后得到细菌菌落数。
仪器 5 项试剂 1 项步骤 4 步
仪器设备
高压蒸汽灭菌器恒温培养箱（36℃±1℃）采样支架无菌平皿（直径90 mm）pH计或精密pH试纸
试剂材料
营养琼脂培养基
分析步骤
1采样点应符合A.2的要求。
2采样环境条件应符合4.1.4.2的要求。
3应无菌操作，将营养琼脂平板置于采样点处，打开皿盖，暴露5 min后盖上皿盖。
4应符合4.1.5的要求。
撞击法5.1
采用撞击式空气微生物采样器，使空气通过狭缝或小孔产生高速气流，从而将悬浮在空气中的微生物采集到沙氏琼脂平板上，经28℃±1℃、3 d~5 d培养后得到真菌菌落数。
仪器 5 项试剂 4 项步骤 4 步
仪器设备
六级筛孔撞击式微生物采样器高压蒸汽灭菌器真菌培养箱（28℃±1℃）无菌平皿（直径90 mm）pH计或精密pH试纸
试剂材料
蛋白胨（10.0 g）葡萄糖（40.0 g）琼脂（20.0 g）纯水（1000 mL）
分析步骤
1采样布点应符合A.1的要求。
2采样环境条件应符合4.1.4.2的要求。
3应无菌操作，将沙氏琼脂平板逐级装入六级筛孔撞击式微生物采样器，以28.3 L/min流量采集5 min~15 min，采样器使用按照说明书要求进行。
4将采集真菌后的沙氏琼脂平板倒置于28℃±1℃的真菌培养箱中培养，第3天开始观察真菌生长情况，并于第5天记录结果。若真菌数量过多，可于第3天计数结果并记录培养时间。
撞击法（真菌总数）5.1.6.1、5.1.6.2
仪器 0 项试剂 0 项步骤 0 步
未解析到方法实质内容（可能为引用条款，待人工核对）
自然沉降法5.2
将沙氏琼脂平板暴露在空气中，微生物依靠重力作用自然沉降到平板上，经实验室培养后得到真菌总数。
仪器 5 项试剂 1 项步骤 3 步
仪器设备
高压蒸汽灭菌器真菌培养箱（28℃±1℃）采样支架无菌平皿（直径90 mm）pH计或精密pH试纸
试剂材料
沙氏琼脂培养基
分析步骤
1应无菌操作，将沙氏琼脂平板置于采样点处，打开皿盖，暴露5 min后盖上皿盖。
2检验步骤应符合5.1.5的要求。
3计数每块平板上生长的真菌菌落数。
β-溶血性链球菌撞击法6
采用撞击式空气微生物采样器，使空气通过狭缝或小孔产生高速气流，从而将悬浮在空气中的微生物采集到血琼脂平板上，经36℃±1℃，培养18 h～24 h后计数和生化鉴定，得到β-溶血性链球菌菌落数。
仪器 6 项试剂 3 项步骤 7 步
仪器设备
六级筛孔撞击式微生物采样器高压蒸汽灭菌器恒温培养箱（36℃±1℃）普通显微镜（10倍～100倍）电子天平pH计或精密pH试纸
试剂材料
血琼脂平板革兰氏染色液（结晶紫染色液、革兰氏碘液、沙黄复染液）3%过氧化氢溶液（3%）
分析步骤
1应无菌操作，将血琼脂平板逐级装入六级筛孔撞击式微生物采样器，以28.3 L/min流量采集5 min～15 min，采样器使用按照说明书要求进行。
2培养方法：采样后的血琼脂平板在36℃±1℃培养箱中培养18 h～24 h。
3菌落形态：培养后，在血琼脂平板上形成灰白色、表面突起、直径0.5 mm～0.7 mm的细小菌落，菌落透明或半透明，表面光滑有乳光；菌落周围有明显的2 mm～4 mm界限分明、完全透明无色溶血环。
4革兰氏染色镜检：挑取可疑菌落纯化后染色镜检。β-溶血性链球菌为革兰氏阳性无芽孢球菌，圆形或卵圆形，呈链状排列。
5触酶试验：挑取可疑菌落于洁净的载玻片上，滴加适量的3%过氧化氢溶液，立即产生气泡者为阳性，β-溶血性链球菌为阴性。
6其他检验：使用生化鉴定试剂盒或生化鉴定卡对可疑菌落进行鉴定。
7综合以上实验结果，确定为β-溶血性链球菌。
嗜肺军团菌培养法7.1
利用惯性作用将悬浮的微生物采集到液体中，样品经培养在甘氨酸-万古霉素-多黏菌素B-放线菌酮(GVPC)培养基琼脂平板上生成典型菌落，并在缓冲活性炭酵母浸膏(BCYE)琼脂平板上生长而在L-半胱氨酸缺失的缓冲活性炭酵母浸膏(BCYE-Cys)培养基琼脂平板上不生长，经生化鉴定和血清学鉴定为嗜肺军团菌。
仪器 13 项试剂 8 项步骤 0 步
仪器设备
微生物气溶胶采样器（采样流量≥100 L/min）液体冲击式微生物气溶胶采样器（采样流量7 L/min～15 L/min）离心管（容积50 mL）无菌平皿（直径90 mm）CO2培养箱（36℃±1℃）紫外线灯（波长360 nm±2 nm）涡旋振荡器普通光学显微镜水浴箱无菌接种环（直径3 mm）微量移液器（100 μL, 200 μL）高压蒸汽灭菌器pH计或精密pH试纸
试剂材料
BCYE琼脂培养基BCYE-Cys培养基GVPC培养基革兰氏染色液马尿酸盐生化反应管硝酸盐生化反应管尿素生化反应管明胶生化反应管
荧光聚合酶链(PCR)快速检测法7.2
针对嗜肺军团菌 mip 基因高度保守区域设计特异性引物和探针，在反应体系中含嗜肺军团菌基因组模板的情况下，聚合酶链反应(PCR)得以进行并释放荧光信号。利用仪器对 PCR 过程中相应通道的信号强度进行实时监测和输出，实现检测结果的定性分析。
仪器 3 项试剂 6 项步骤 2 步
仪器设备
荧光 PCR 仪离心机（不小于 12 000 r/min）移液器（10 μL～100 μL）
试剂材料
上游引物（5'-GAAAATAAAGTAAAAGGGGAAGCC-3'）下游引物（5'-ATCAATCAGACGACCAGTGTATTC-3'）探针（5'-FAM-AGGCGTTGTTGTATTGCCAAGTGGTT-TAMRA-3'）PCR 反应体系DNA 提取液无核酸酶的去离子水
分析步骤
1荧光 PCR 扩增体系(25 μL): 其中 PCR 反应体系 10 μL，上、下游引物(10 μmol/L)各 1.25 μL，探针(10 μmol/L) 0.625 μL，模板 5 μL，无核酸酶的去离子水补足体积至 25 μL。
2扩增: 50 ℃ 尿嘧啶-N-糖基化酶(UNG 酶)处理 2 min，95 ℃ 预变性 3 min; 然后 95 ℃ 变性 5 s，55 ℃ 退火延伸 60 s，检测荧光信号，进行 40 个循环。
公式已就位——生成原始记录后，这些公式将变成 Excel 里的活公式，改读数自动重算重判
细菌总数浓度计算公式4.1.6.1
C = \dfrac{Σ_{i=1}^{6} N_i × 1000}{v × t}
计算表达式（可直接用于 Excel/程序）
C = (Σ_{i=1}^{6} N_i × 1000) / (v × t)
C细菌总数浓度CFU/m³
N_i每级平板菌落数CFU
v采样流量L/min
t采样时间min
i平板数量
真菌总数浓度计算公式5.1.6.1
C = \dfrac{Σ_{i=1}^{6} N_i × 1000}{v × t}
计算表达式（可直接用于 Excel/程序）
C = (Σ_{i=1}^{6} N_i × 1000) / (v × t)
C真菌总数浓度CFU/m³
N_i每级平板菌落数CFU
v采样流量L/min
t采样时间min
i平板数量
β-溶血性链球菌浓度计算公式6.6.1
C = \dfrac{Σ_{i=1}^{6} N_i × 1000}{v × t}
计算表达式（可直接用于 Excel/程序）
C = (Σ_{i=1}^{6} N_i × 1000) / (v × t)
Cβ-溶血性链球菌浓度CFU/m³
N_i每级平板经生化鉴定为β-溶血性链球菌阳性的菌落数CFU
v采样流量L/min
t采样时间min
i平板数量
嗜肺军团菌浓度计算7.1.6.1
C = \dfrac{∑_{i=1}^{k} a_i \cdot (n_i / N_i) \cdot v}{v_a \cdot V}
计算表达式（可直接用于 Excel/程序）
C = (∑_{i=1}^{k} a_i * (n_i / N_i) * v) / (v_a * V)
C嗜肺军团菌浓度CFU/m³
a_iGVPC 培养基上某一类型疑似嗜肺军团菌的菌落数CFU
n_i该类型确认的嗜肺军团菌菌落数CFU
N_i培养基上挑取的该类型疑似嗜肺军团菌菌落数CFU
v采样结束后的采样液体积mL
v_a接种液的体积(原液、热处理样品: v_a=0.2; 酸处理样品: v_a=0.1)mL
V采集的空气体积m³
k疑似嗜肺军团菌的类型 (i=1,2,3,...,k)
标准中"施加在执行过程与条件上的要求"（C1 环境 / C4 样品 / C6 质控 / C7 条件限值 / C8 适用范围 / C9 过程参数），是原始记录模板与自动核查的数据源。
C1 · 环境条件采样环境 · 关闭门窗时间
15 ~ 30 min采样时出处：4.1.4.1
C1 · 环境条件强制采样环境条件 · 采样环境条件
采样环境条件:应符合 4.1.4.2 的要求。采样时出处：7.1.4.1
C2 · 试验介质/溶液强制纯水 · 水质等级
纯水水质应符合 GB/T 6682 三级水或以上的要求。培养基配制用纯水出处：3.6
C2 · 试验介质/溶液培养基 · pH
7.4±0.2蛋白胨、牛肉浸膏、氯化钠溶于纯水后出处：3.6
C2 · 试验介质/溶液培养基 · pH
5.6±0.2蛋白胨和葡萄糖溶解于纯水后出处：4.2.4.4
C2 · 试验介质/溶液血琼脂培养基 · 脱纤维羊血用量
50 ~ 100 mL培养基配制出处：5.2.4.4
C2 · 试验介质/溶液培养基 · pH
7.5±0.1蛋白胨、氯化钠、琼脂加热溶化于纯水后出处：5.2.4.4
C2 · 试验介质/溶液ACES缓冲液 · pH
6.8±0.2用0.1 mol/L KOH或0.1 mol/L H2SO4调节出处：6.7.3
C2 · 试验介质/溶液培养基 · 最终pH
6.8±0.2室温25℃时出处：6.7.3
C2 · 试验介质/溶液硫酸多黏菌素B溶液 · 浓度
14545±None IU/mL200 mg溶解于100 mL纯水出处：6.7.3
C2 · 试验介质/溶液BCYE培养基 · pH
6.8±0.2加入α-酮戊二酸单钾盐后加入3 g甘氨酸后调节出处：6.7.3
C2 · 试验介质/溶液强制尿素生化反应管 · 尿素最终浓度与pH
7.2±0.1尿素最终浓度2%出处：6.7.3
C2 · 试验介质/溶液强制明胶生化反应管 · 最终pH
6.9±0.1121℃高压灭菌10 min后迅速冷却凝固出处：6.7.3
C2 · 试验介质/溶液盐酸-氯化钾溶液 · pH与保存期限
2.2±0.2用1 mol/L氢氧化钾调节，精密pH试纸或pH计测量，具塞玻璃瓶室温避光出处：6.7.3
C2 · 试验介质/溶液强制培养基和试剂 · 质量要求
培养基和试剂应符合 GB 4789.28 的质量要求。应符合GB 4789.28出处：7.1.4.4
C2 · 试验介质/溶液强制成品培养基 · 使用有效期
对于购买的成品培养基，应在有效期内使用。购买的成品培养基出处：7.1.7.1
C2 · 试验介质/溶液强制试剂和材料 · 无菌状态及无菌操作
在采样开始前,确保所用试剂和材料为无菌状态,操作过程和样品运输中应无菌操作,避免人为污染。采样开始前及操作过程和样品运输中出处：7.1.7.1
C4 · 样品采集/保存采集后的平板 · 保存温度
4±None ℃样品保存和运输出处：4.1.4.3
C4 · 样品采集/保存采集后的平板 · 运输时限
≤ 4 h样品保存和运输出处：4.1.4.3
C4 · 样品采集/保存L-半胱氨酸盐酸盐和焦磷酸铁溶液 · 保存温度与期限
≤ 3 月0.22 μm滤膜过滤除菌后储存于无菌容器，-20℃保存出处：6.7.3
C4 · 样品采集/保存平板 · 储存温度与期限
≤ 1 月2℃～8℃密封容器避光储存出处：6.7.3
C4 · 样品采集/保存硫酸多黏菌素B溶液 · 分装体积与保存温度
用无菌管进行分装,每管 5.5 mL,于 -25℃ ~ -15℃ 保存无菌管分装，-25℃～-15℃保存出处：6.7.3
C4 · 样品采集/保存万古霉素溶液 · 分装体积与保存温度
每管 1 mL，于 -25℃ ~ -15℃ 保存每管1 mL，-25℃～-15℃保存出处：6.7.3
C4 · 样品采集/保存放线菌酮溶液 · 分装体积与保存温度
用无菌管进行分装，每管 4 mL，于 -25℃ ~ -15℃ 保存每管4 mL，-25℃～-15℃保存出处：6.7.3
C4 · 样品采集/保存5%茚三酮溶液 · 保存期限
≤ 7 d避光冷藏出处：6.7.3
C4 · 样品采集/保存强制采集的样品 · 保存运输条件及送检时限
≤ 4 h不应冷冻，避光、防止受热出处：7.1.4.3
C4 · 样品采集/保存强制空气采样器 · 与其他采样器距离
≥ 1 m同时采集其他指标空气样品时出处：7.1.7.5
C4 · 样品采集/保存强制采样点高度 · 距地面高度
1.2 ~ 1.5 m原则上应与成人呼吸带高度一致出处：7.1.7.5
C4 · 样品采集/保存强制采样点位置 · 离墙壁距离
≥ 0.5 m采样点应避开通风口、通风道和热源出处：7.1.7.5
C4 · 样品采集/保存强制采样点位置 · 离门窗距离
≥ 1 m采样点应避开通风口、通风道和热源出处：7.1.7.5
C4 · 样品采集/保存强制空气采样器 · 与其他采样器距离
≥ 1 m同时采集其他指标空气样品时出处：7.1.7.5
C5 · 设备能力要求强制采样器 · 流量校准相对偏差
≤ 5 %负载条件下用检定/校准合格的流量计校准出处：4.1.7.1
C5 · 设备能力要求强制采样系统 · 气密性
在采样前应对采样系统的气密性进行检查，不应漏气采样前出处：4.1.7.2
C5 · 设备能力要求真菌培养箱 · 温度
28±1 ℃真菌培养出处：4.2.4.4
C5 · 设备能力要求微生物气溶胶采样器 · 采样流量
≥ 100 L/min微生物气溶胶采样器出处：6.7.3
C5 · 设备能力要求液体冲击式微生物气溶胶采样器 · 采样流量
7 ~ 15 L/min液体冲击式微生物气溶胶采样器出处：6.7.3
C5 · 设备能力要求离心管 · 容积
50±None mL离心管出处：6.7.3
C5 · 设备能力要求无菌接种环 · 直径
3±None mm无菌接种环出处：6.7.3
C5 · 设备能力要求强制采样器 · 流量校准相对偏差
≤ 5 %定期在负载条件下用检定/校准合格的流量计校准，或按说明书要求校准出处：7.1.7.3
C5 · 设备能力要求离心机 · 转速
≥ 12000 r/min离心机能力要求出处：7.1.7.5
C6 · 精密度/质控限强制培养基平板 · 无菌检查
每批培养基平板配置后应做无菌检查，可每批选定3块平板，按4.1.5的步骤培养观察，结果应无菌落生长。每批培养基平板配置后，每批选定3块平板出处：4.1.4.4
C6 · 精密度/质控限强制现场空白对照 · 空白对照试验
应同时进行现场空白对照试验，每次或每个区域取一个对照平板，与采样平板同法操作但不需暴露采样，然后与采样后的平板一起放入培养箱培养，结果应无菌落生长。每次或每个区域取一个对照平板出处：4.1.7.3
C6 · 精密度/质控限空白对照 · 空白对照有菌生长处理
如空白对照有菌生长，则本批次样品作废，需重新采样检测。空白对照有菌生长时出处：4.1.7.4
C6 · 精密度/质控限强制培养基平板 · 无菌检查
每批培养基平板配置后应做无菌检查,可每批选定3块平板,按5.1.5的步骤培养观察,结果应无菌落生长。每批培养基平板配置后，每批选定3块平板出处：5.1.4.4
C6 · 精密度/质控限强制试验对照设置 · 阳性/阴性对照
试验应设置阳性对照和阴性对照试验应设置对照出处：6.5.6
C6 · 精密度/质控限强制培养基平板无菌检查 · 无菌落生长
≤ 0 个菌落每批培养基平板配置后，每批选定3块平板出处：6.7.1
C6 · 精密度/质控限强制检测过程 · 阳性对照设置
应设置阳性对照(嗜肺军团菌标准菌株 ATCC 33152 或其他等效标准菌株)。应设置阳性对照(嗜肺军团菌标准菌株ATCC 33152或其他等效标准菌株)出处：7.1.7.2
C6 · 精密度/质控限阳性对照 · Ct值判定
≤ 36有明显指数增长出处：7.1.7.5
C6 · 精密度/质控限阴性对照 · Ct值判定
≥ 39Ct值>39或无Ct值，线形为直线或轻微斜线，无明显指数增长期和平台期出处：7.1.7.5
C7 · 分级/条件限值住宿场所客房 · 测点数量
1 ~ 5 个客房室内面积<50 m2设1个；50 m2~200 m2设2个；>200 m2设3个~5个出处：7.1.7.5
C7 · 分级/条件限值影剧院等场所营业厅/室 · 测点数量
1 ~ 5 个座位数<300设1~2个；300~500设2~3个；501~1000设3~4个；>1000设5个出处：7.1.7.5
C7 · 分级/条件限值游艺厅、歌舞厅等场所 · 测点数量
≥ 1 个营业面积<50 m2出处：7.1.7.5
C7 · 分级/条件限值室内空气测点数量 · 测点设置数量
室内面积 <50 m^{2} 的设置3个测点，室内面积 ≥50 m^{2} 的设置5个测点。室内面积<50 m²设3个测点；室内面积≥50 m²设5个测点出处：7.1.7.5
C8 · 适用范围与限制强制细菌总数结果 · 修约规则
计算得出的细菌总数的值应四舍五入到整数。结果计算出处：4.1.4.4
C8 · 适用范围与限制强制细菌总数结果 · 报告方式
一个区域空气中细菌总数的测定结果按该区域全部采样点中细菌总数测定值的平均值报告，检验结果以菌落形成单位每平皿(CFU/皿)表示，计算得出的细菌总数的值应四舍五入到整数。一个区域空气中细菌总数的测定结果出处：4.2.4.4
C8 · 适用范围与限制强制真菌总数结果 · 修约规则
计算得出的真菌总数的值应四舍五入到整数。结果计算出处：5.1.4.4
C8 · 适用范围与限制强制真菌总数结果 · 报告方式
一个区域空气中真菌总数的测定结果按该区域全部采样点中真菌总数测定值的平均值报告，检验结果以菌落形成单位每平皿(CFU/皿)表示，计算得出的真菌总数的值应四舍五入到整数。一个区域空气中真菌总数的测定结果出处：5.2.4.4
C8 · 适用范围与限制强制β-溶血性链球菌计算结果 · 修约规则
计算得出的 β-溶血性链球菌的值应四舍五入到整数计算得出的结果出处：6.5.6
C8 · 适用范围与限制允许β-溶血性链球菌结果报告 · 未检出报告规则
在所有平板均无可疑菌落生长时报告该区域 β-溶血性链球菌未检出所有平板均无可疑菌落生长时出处：6.5.6
C8 · 适用范围与限制强制嗜肺军团菌计算值 · 修约方式
计算得出的嗜肺军团菌的值应四舍五入到整数。计算得出结果时出处：7.1.4.4
C8 · 适用范围与限制检测结果报告 · 未检出时的报告方式
否则报告“未检出嗜肺军团菌”。未检出时出处：7.1.4.4
C8 · 适用范围与限制实验人员个体防护和检测废弃物处理 · 执行标准
实验人员个体防护和检测废弃物的处理应按照 GB 19489 执行。应按照GB 19489执行出处：7.1.7.4
C8 · 适用范围与限制强制实验操作人员 · 生物安全防护实验室工作经验
因嗜肺军团菌是致病菌，实验操作人员应有二级生物安全防护实验室工作的实践经验。因嗜肺军团菌是致病菌出处：7.1.7.5
C8 · 适用范围与限制强制检测过程 · 应符合7.1.4的要求
应符合 7.1.4 的要求。应符合7.1.4出处：7.1.7.5
C8 · 适用范围与限制样本检测结果 · 阳性判定Ct值
≤ 36有明显指数增长出处：7.1.7.5
C8 · 适用范围与限制允许样本检测结果 · 可疑判定Ct值范围
36 ~ 39Ct值在36～39出处：7.1.7.5
C8 · 适用范围与限制强制可疑样本 · 重复检测判定规则
此时应对样本进行重复检测,如重复实验结果 Ct 值仍在 36～39,有明显指数增长,则判定为阳性,否则为阴性。Ct值在36～39时重复检测，如仍在此范围且有明显指数增长判阳性，否则阴性出处：7.1.7.5
C8 · 适用范围与限制样本检测结果 · 阴性判定Ct值
≥ 39Ct值>39或无Ct值出处：7.1.7.5
C8 · 适用范围与限制强制商品化PCR试剂盒 · 操作和结果判定依据
如果使用商品化 PCR 试剂盒,应按照试剂盒说明书进行操作和结果判定。如果使用商品化PCR试剂盒出处：7.1.7.5
C8 · 适用范围与限制强制区域采样点 · 初筛阳性后培养鉴定要求
一个区域中任意一个采样点嗜肺军团菌荧光 PCR 检测初筛阳性,应按 7.1.5 进行培养鉴定为活菌后再报告结果。一个区域中任意一个采样点荧光PCR检测初筛阳性出处：7.1.7.5
C8 · 适用范围与限制强制检测过程 · 应符合7.1.7的要求
应符合 7.1.7 的要求。应符合7.1.7出处：7.1.7.5
C9 · 过程控制参数培养基 · 灭菌条件
121 ℃，15 min 高压灭菌加入琼脂后出处：3.6
C9 · 过程控制参数培养基 · 倾注温度
45 ~ 50 ℃以无菌操作每皿倾注 15 mL 培养基出处：3.6
C9 · 过程控制参数采样器 · 流量
28.3±None L/min六级筛孔撞击式微生物采样器采样出处：4.1.4.2
C9 · 过程控制参数采样 · 采集时间
5 ~ 15 min六级筛孔撞击式微生物采样器采样出处：4.1.4.2
C9 · 过程控制参数营养琼脂平板 · 培养温度
36±1 ℃倒置培养出处：4.1.4.4
C9 · 过程控制参数营养琼脂平板 · 培养时间
48±2 h倒置培养出处：4.1.4.4
C9 · 过程控制参数强制采样头 · 消毒
采样前应用75%医用酒精棉擦拭采样头，待酒精挥发后采样。采样前出处：4.1.7.2
C9 · 过程控制参数强制试剂和材料 · 无菌状态
在采样开始前，确保所用试剂和材料为无菌状态，操作过程和样品运输中应无菌操作，避免人为污染。采样开始前及操作过程和样品运输中出处：4.1.7.2
C9 · 过程控制参数营养琼脂平板 · 培养温度
36±1 ℃自然沉降法出处：4.1.7.5
C9 · 过程控制参数营养琼脂平板 · 培养时间
48±None h自然沉降法出处：4.1.7.5
C9 · 过程控制参数营养琼脂平板 · 暴露时间
5±None min自然沉降法采样出处：4.2.4.2
C9 · 过程控制参数培养基 · 灭菌条件
经 115℃ 高压蒸汽灭菌 15 min分装于玻璃容器中出处：4.2.4.4
C9 · 过程控制参数采样器 · 流量
28.3±None L/min六级筛孔撞击式微生物采样器采样出处：5.1.4.2
C9 · 过程控制参数采样 · 采集时间
5 ~ 15 min六级筛孔撞击式微生物采样器采样出处：5.1.4.2
C9 · 过程控制参数沙氏琼脂平板 · 暴露时间
5±None min自然沉降法采样出处：5.2.4.2
C9 · 过程控制参数脱纤维羊血 · 振摇时间
10±None min无菌操作条件下制备脱纤维羊血出处：5.2.4.4
C9 · 过程控制参数培养基 · 灭菌条件
121℃, 15 min 灭菌培养基配制出处：5.2.4.4
C9 · 过程控制参数血琼脂平板 · 倾注温度
45±None ℃加入无菌脱纤维羊血后每皿倾注 15 mL出处：5.2.4.4
C9 · 过程控制参数革兰氏染色操作 · 染色/脱色时间
15 ~ 30 s95%乙醇脱色步骤出处：5.2.4.4
C9 · 过程控制参数微生物气溶胶采样 · 采样流量与采样时间
5 ~ 15 min六级筛孔撞击式微生物采样器，流量28.3 L/min，无菌操作出处：6.4.2
C9 · 过程控制参数血琼脂平板培养 · 培养温度与时间
18 ~ 24 h36℃±1℃培养箱出处：6.4.4
C9 · 过程控制参数ACES溶解 · 水浴温度
45 ~ 50 ℃10.0 g ACES颗粒加入500 mL纯水出处：6.7.3
C9 · 过程控制参数培养基灭菌 · 灭菌温度与时间
加入琼脂混合均匀后于 121 ℃ 高压蒸气灭菌 15 min加入琼脂混合均匀后出处：6.7.3
C9 · 过程控制参数培养基冷却 · 冷却温度
灭菌后用水浴冷却至 50 ℃ 左右加入溶解好的 L-半胱氨酸盐酸盐溶液和焦磷酸铁溶液灭菌后水浴冷却出处：6.7.3
C9 · 过程控制参数平板制备 · 倾注体积与平皿直径
每皿倾注 20 mL 培养基于直径为 90 mm 的平皿中制备平板直径为90 mm的平皿出处：6.7.3
C9 · 过程控制参数尿素生化反应管培养基 · 灭菌温度与时间
于 121℃ 高压灭菌 15 min加入琼脂加热溶化并分装烧瓶后出处：6.7.3
C9 · 过程控制参数气溶胶采样 · 每个气溶胶样品采集空气量
2±None m3将20 mL采样吸收液倒入气溶胶采样器，按说明书操作出处：7.1.4.2
C9 · 过程控制参数强制气溶胶采样器 · 避免交叉污染
重复使用同一气溶胶采样器采集不同点空气样本时, 应避免交叉污染。重复使用同一气溶胶采样器采集不同点空气样本时出处：7.1.4.3
C9 · 过程控制参数样品热处理 · 水浴温度与加热时间
50±1 ℃取1 mL样品置恒温水浴箱中加热30 min出处：7.1.4.4
C9 · 过程控制参数样品酸处理 · 酸缓冲液加入量及放置时间
5±None min取1 mL样品加入1 mL酸缓冲液摇匀出处：7.1.4.4
C9 · 过程控制参数接种 · 接种体积
0.2±None mL样品原液、热处理样品及酸处理样品分别接种GVPC琼脂平板出处：7.1.4.4
C9 · 过程控制参数培养 · CO2浓度与培养时间
5±None %培养箱中培养出处：7.1.4.4
C9 · 过程控制参数可疑菌落培养 · 培养温度与时间
36±1 ℃接种于BCYE和BCYE-Cys平板，CO2浓度5%，培养2 d出处：7.1.4.4
C9 · 过程控制参数强制疑似菌落 · 每种类型至少选择菌落数
≥ 3 个有不同类型疑似军团菌菌落时出处：7.1.4.4
C9 · 过程控制参数氧化酶试验 · 阳性判定时间
≤ 30 s出现紫罗兰色或深蓝色出处：7.1.4.4
C9 · 过程控制参数氧化酶试验 · 阴性判定时间
≥ 2 min不变色出处：7.1.4.4
C9 · 过程控制参数尿素酶试验 · 培养温度与观察时间
36±1 ℃穿刺接种尿素琼脂培养基，培养2 h、24 h分别观察出处：7.1.4.4
C9 · 过程控制参数明胶液化试验 · 培养温度时间及冷藏观察条件
36±1 ℃穿刺接种明胶培养基，培养24 h±2 h后置4℃±2℃冰箱10 min~30 min观察出处：7.1.4.4
C9 · 过程控制参数马尿酸水解试验 · 马尿酸钠浓度与体积
0.4±None mL挑取待测菌落加到1%马尿酸钠试管中制成菌悬液出处：7.1.4.4
C9 · 过程控制参数马尿酸水解试验 · 温育温度与时间
36±1 ℃水浴温育或培养箱培养24 h出处：7.1.4.4
C9 · 过程控制参数马尿酸水解试验 · 茚三酮加入量及温育观察时间
10±None min沿试管壁加入0.2 mL茚三酮溶液，36℃±1℃水浴温育或培养箱放置出处：7.1.4.4
C9 · 过程控制参数马尿酸水解试验 · 阳性判定时间
≤ 15 min溶液出现蓝紫色变化出处：7.1.4.4
C9 · 过程控制参数阳性反应菌 · 进一步做玻片凝集试验
如阳性反应，再与相应的单价血清做玻片凝集试验，作出判断。如阳性反应出处：7.1.4.4
C9 · 过程控制参数吸收液样品处理 · 离心转速、时间及煮沸条件
12000±None r/min吸取采样后吸收液1 mL加入1.5 mL无菌离心管，离心5 min弃上清，加DNA提取液50 μL悬浮，100℃煮沸5 min，再离心2 min取上清出处：7.1.7.5
C9 · 过程控制参数允许可疑菌落处理 · DNA提取液体积、煮沸及离心条件
50±None μL挑取单个可疑菌落于DNA提取液中振荡混匀，100℃水浴煮沸5 min，12000 r/min离心2 min取上清出处：7.1.7.5
C9 · 过程控制参数荧光PCR扩增体系 · 反应体系各组分体积
25±None μLPCR反应体系10 μL，上下游引物(10 μmol/L)各1.25 μL，探针(10 μmol/L)0.625 μL，模板5 μL，无核酸酶去离子水补足出处：7.1.7.5
C9 · 过程控制参数荧光PCR扩增 · UNG酶处理及预变性温度时间
50±None ℃50℃ UNG酶处理2 min，95℃预变性3 min出处：7.1.7.5
C9 · 过程控制参数荧光PCR扩增 · 变性退火延伸温度时间及循环数
40±None 个循环95℃变性5 s，55℃退火延伸60 s，检测荧光信号出处：7.1.7.5
GB 4789.28食品安全国家标准 食品微生物学检验 培养基和试剂的质量要求最新版适用规范性引用
GB/T 6682分析实验室用水规格和试验方法最新版适用规范性引用
GB 19489实验室 生物安全通用要求最新版适用规范性引用
检测能力（方法标准）认可领域：02 化学 › 0239 场所、室内空气及有限空间中的空气
序号检测对象项目/参数领域代码检测标准（方法）名称及编号（含年号）说明备注
序号名称
1公共场所卫生1细菌总数023901《公共场所卫生检验方法 第 3 部分: 空气微生物指标》GB/T18204.3-2025 4.1、4.2
Examination methods for public places—Part 3: Airborne microorganism indicators
22真菌总数023901《公共场所卫生检验方法 第 3 部分: 空气微生物指标》GB/T18204.3-2025 5.1
Examination methods for public places—Part 3: Airborne microorganism indicators
共 2 项参数：2 项已自动推荐领域代码，0 项待人工确认。领域代码依据 CNAS-AL06:2024 规则推荐，检测对象依据：标准名称（方法标准主体）；正式申报前请人工核对，「说明」列的限制范围（只测/不测、量程等）按实验室实际填写。
解析模型与复核模型对以下关键数值意见不一。 点击您认可的一侧卡片即可投票，多数人的意见即最终结论；每项仅可投一次，首次投票 +2 LP。 已定案项目会在正文对应位置标注 ⚖，悬停可见两模型的分歧详情。
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